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本制品是蛋白光学定量方法中一种常用试剂。在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465nm变为595nm，同时颜色也由棕色变为蓝色，该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA与Bradford蛋白质定量试剂混合，测量在595nm处的吸收值，再建立一系列稀释BSA的标准曲线，蛋白质的浓度即可以根据标准曲线而确定。

• 检测速度快。
  
• 灵敏度高，最小检测蛋白量达到0.2μg，待测样品体积1～20μL。
  
• 在10～150μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。
  
• 与还原性糖和还原性巯基试剂兼容。

• 使用前请将Bradford蛋白定量试剂颠倒混匀3～5次，并保温至室温后再使用。
  
• 样品检测后的A595值应在标准曲线范围之内，若超过此范围则需将样品酌情稀释或浓缩。
  
• 加完Bradford蛋白定量试剂后，须在10min内完成吸光度的测定，防止沉淀形成后影响实验结果，如果已经产生了沉淀，可以在测量前先颠倒混匀几次，可以减少误差。
  
• 进行吸光度测定时，请使用玻璃或塑料比色皿，不可使用石英比色皿。使用后尽快用无水乙醇清洗比色皿。
  
• 所用的分光光度计需要进行预热，否则会影响结果的准确性。
  
• 由于不同蛋白光吸收值各不相同，因此如果能用目的蛋白做标准曲线可得到更正确的结果。
  
• Bradford法测定蛋白浓度不受还原试剂的影响，但是受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20、60、80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒。
  
• 测量顺序应按蛋白浓度由低到高的顺序(以避免影响结果)，或使用一次性塑料比色杯。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 分光光度法，1mL比色皿(线性范围：0μg/mL~10μg/mL)
  
  • 配制0.5mg/mL BSA溶液。
    
  • 取10支1mL离心管，按下表方式配制蛋白质标准样(每个标准样设置一个重复)。
    

    成分\编号	1	2	3	4	5
    0.5mg/mL BSA(μL)	0	5	10	15	20
    0.15M NaCl(μL)	100	95	90	85	80
    BSA的量(μg)	0	2.5	5	7.5	10

  • 另取10支离心管，每管中加入100μL稀释的标准BSA溶液，然后加入1mL Bradford蛋白质定量试剂并混合。在室温下静置2分钟(每个标准样设置一个重复)。
    
  • 使用1mL比色皿测量595nm处的吸光度，绘制标准曲线。
    
  • 对于待测样品，用0.15M NaCl做适当倍数的稀释，取100μL加入1mL Bradford蛋白质定量试剂并混合。
    在室温下静置2分钟，测量595nm处的吸光度，并参照标准曲线计算样品浓度(可设置2～3个重复)。
• 酶标板法-96孔板(线性范围：0μg/mL-10μg/mL)
  
  • 配制0.5mg/mL BSA溶液。
    

    成分\编号	1	2	3	4	5
    0.5mg/mL BSA(μL)	0	2.5	5	7.5	10
    0.15M NaCl(μL)	50	47.5	45	42.5	40
    BSA的量(μg)	0	0.5	1	1.5	2

  • 选取酶标板上10个孔，各孔分别加入20μL标准样(每个标准样设置一个重复)。
    
  • 各酶标孔加入200μL Bradford蛋白定量试剂，混合，室温下静置2分钟。
    
  • 酶标仪上测各孔的A595值，绘制标准曲线。
    
  • 对于待测样品，用0.15M NaCl做适当倍数的稀释，取20μL加入酶标板孔中，再加入200μL Bradford蛋白定量试剂，混合。在室温下静置2分钟，测量595nm处的吸光度，并参照标准曲线计算样品浓度(可设置2～3个重复)。